溶液中待測(cè)物分子中的價(jià)電子能夠選擇性地吸收紫外或可見光,從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),形成紫外可見吸收光譜,根據(jù)紫外可見吸收光譜中的吸收峰和摩爾吸收系數(shù),進(jìn)行定性分析。這就是化學(xué)試劑分子吸收的測(cè)定方法——分光光度法,本文對(duì)這種方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹。
1. 吸收曲線法
使用自動(dòng)記錄型儀器時(shí),可自動(dòng)掃描繪出吸收曲線。
使用非自動(dòng)記錄型儀器時(shí),在規(guī)定的波長范圍時(shí),每隔5nm~10nm測(cè)定一次吸光度,在吸收峰附近時(shí),應(yīng)每隔1nm~2nm測(cè)定一次,以波長為橫坐標(biāo),相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制吸收曲線。
此方法可適用于定性分析、最大吸收波長的測(cè)定。
2. 工作曲線法
按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定配制四個(gè)以上濃度成適當(dāng)比例的標(biāo)準(zhǔn)溶液,以空白溶液(或溶劑)為參比溶液,同時(shí)用空白溶液(或溶劑)的吸光度進(jìn)行校正。在規(guī)定波長下,分別測(cè)定吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度c為橫坐標(biāo),相應(yīng)的吸光度A為縱坐標(biāo),繪制工作曲線,同時(shí)配制適當(dāng)濃度的樣品溶液,在上述條件下測(cè)定吸光度,并在工作曲線上查出待測(cè)物濃度(圖1),待測(cè)物的濃度應(yīng)在工作曲線范圍內(nèi)。該溶液濃度也可根據(jù)測(cè)定的吸光度用回歸方程法計(jì)算。此方法適用于雜質(zhì)含量的測(cè)定。
3. 分光光度法含量測(cè)定
按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)給出的方法測(cè)定。特效試劑可在規(guī)定條件下與被測(cè)物生成有色配位化合物,測(cè)定其溶液的吸光度,按標(biāo)準(zhǔn)中給出的換算系數(shù)計(jì)算含量,也可用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)照法進(jìn)行計(jì)算;某些酸堿指示劑可采用柱層析法將雜質(zhì)分離后測(cè)主體溶液的吸光度,用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法計(jì)算含量。
4. 摩爾吸收系數(shù)測(cè)定
按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定條件測(cè)定。
摩爾吸收系數(shù)E,數(shù)值以L/(cm*mol)表示,按式(2)計(jì)算:
式中:
A——吸光度的數(shù)值;c——被測(cè)物的物質(zhì)的量濃度的數(shù)值,單位為摩爾每升(mol/L);b—光路長度(即吸收池厚度)的數(shù)值,單位為厘米(cm)。
5. 靈敏度測(cè)定
按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件測(cè)定。靈敏度可用摩爾吸收系數(shù)表示。
6. 質(zhì)量吸收系數(shù)測(cè)定按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定條件測(cè)定。
質(zhì)量吸收系數(shù)a,數(shù)值以L/(cm*g)表示,按式(3)計(jì)算:
A——吸光度的數(shù)值;
p——被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值,單位為克每升(g/L);
b——光路長度(即吸收池厚度)的數(shù)值,單位為厘米(cm)。
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